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NobleRyder GUS染色液 即用型液體試劑

  • 型   號:D6611
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-09-18
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

NobleRyder GUS染色液 即用型液體試劑
NobleRyder 即用型液體試劑 D6611-100ml

GUS染色液

產(chǎn)品簡介:

GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶,該基因常作為融合標記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達E.coli GUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性,絕大多數(shù)植物沒有檢測到葡萄糖苷酸酶的背景活性,以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物,其反應產(chǎn)物可用多種方法檢測出來。5-Bromo-chloro-3-indolyl β-D-glucuronide,cyclohexylammonium salt(簡稱為X-Gluc或X-GlcA)分子量為521.8,CAS號為18656-96-7,是檢測大腸桿菌中GUS基因的底物,可快速檢測植物中GUS基因融合標記。

β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)簡稱為GUS染色液,其染色原理是適宜的反應條件下,β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍色物質(zhì),該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細胞核組織中的靛藍物質(zhì),具有GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點,可用肉眼或顯微鏡觀察到。GUS染色液可用于生物化學活性分析、免疫分析以及組織和細胞的組織化學染色,多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達分析。該試劑僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。

NobleRyder GUS染色液  即用型液體試劑 

產(chǎn)品組成:

                               編號      

名稱

D6611

110ml

Storage

試劑(A): GUS Buffer A

50ml

RT

試劑(B): GUS Buffer B

0.2ml

4℃ 避光

試劑(C): GUS Buffer C

0.2ml

4℃ 避光

試劑(D): 2×Fixation Buffer

25ml

RT 避光

試劑(E): X-GlcA

80mg

-20℃ 避光

試劑(F): X-GlcA solvent

1ml

RT 避光

試劑(G): Deionized water

100ml

RT 

使用說明書

1份

 


自備材料:
1.無水乙醇、甲醇
2.去離子水
3.小瓶或多孔板、顯微鏡

操作步驟(僅供參考)

配制X- GlcA Solution:取X-GlcA solvent 229μl加入至80mg X-GlcA中或取適量上述2種物質(zhì)溶解,使其濃度達到350mg/ml,輕輕Vortex混勻,即為X- GlcA Solution,分裝后,-20℃避光保存。

按下列比例配制GUS染色液:

組分

體積

GUS Buffer A

2.5ml

GUS Buffer B

10μl

GUS Buffer C

10μl

Deionized water

5.5ml

甲醇

2.0ml

X-GlcA Solution

20μl

Tatal volume

~10ml
 

固定(固定不是必須的步驟,如果不需要固定,直接進行操作步驟4):
1、取轉(zhuǎn)基因植物組織,入3~5ml清潔小瓶或多孔板中。
2、取適量2×Fixation Buffer與去離子水等量稀釋即獲得1×Fixation Buffer。加入1×Fixation Buffer,使Fixation Bufferwan全浸沒組織。室溫孵育45min,棄液。
3、配制洗滌液: GUS Buffer A:去離子水=1:20稀釋,即為洗滌液。用配制好的洗滌液漂洗3次,每次1min。
4、加入適量GUS染色液,使GUS染色液wan全浸沒組織。
5、用真空泵抽取小瓶或多孔板中的氣體,抽取時間應大于2min。該步驟是為了抽取植物組織內(nèi)的氣體,并使染色液更容易進入組織內(nèi)。
6、立即蓋緊瓶子或多孔板,37℃孵育24h。隨著孵育時間的延長,藍色漸漸出現(xiàn),當表達量較高時,GUS活性的部位或位點呈現(xiàn)藍色或藍色斑點。
7、用乙醇脫去樣本的葉綠素,一般樣本浸沒于乙醇1~3h。如有必要可重復該脫色步驟,以便徹di清除葉綠素。樣本保存于乙醇中,可用肉眼或普通光學顯微鏡下觀察。

 注意事項
1、配制好的GUS染色液可以4℃避光保存半個月。
2、X-GlcA Solution應避免反復凍融,否則染色效率會下降。
3、由于組織特異性等原因,藍色顏色反應可能不wan全一致,應注意摸索具體實驗條件。

 有效期: 6個月有效。

NobleRyder GUS染色液  即用型液體試劑

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