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NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型

  • 型   號:VS0979
  • 價   格:
  • 更新時間:2024-09-18
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型
NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型試劑盒 VS0979

NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型

本試劑盒是利用熒光染料(bisbenzimide,Hoechst 33258)檢測支原體污染。這種染料會結(jié)合到DNA的A-T富集區(qū)域,因為支原體的DNA中A-T含量高(55%~80%),所以可將其染色而被檢測到。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后在細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光小點,即為支原體的DNA染色斑,說明有支原體污染。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長為346nm,最大發(fā)射波長為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,最大激發(fā)波長為352nm,最大發(fā)射波長為461nm。

操作步驟:

貼壁細(xì)胞:

1.被檢細(xì)胞接種于無菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中,接種密度為1-2×104。同時,接種正常無支原體感染的同種細(xì)胞,作為陰性對照。

2.5天后,先吸去培養(yǎng)液,再加入1ml的固定液,靜置20min,

3.吸去固定液,晾干。

4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15-20min或室溫靜置20~30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液,加入2ml滅菌超純水洗滌三次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封片液,并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。

懸浮細(xì)胞:

1.收集需檢測的細(xì)胞,1500rpm,5min。

2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上,再加1ml的固定液,靜置20min。

3.吸去固定液,晾干。

4.于每孔中,加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部被檢細(xì)胞),37℃避光放置15~20min或室溫靜置20~30min。

5.吸去Hoechst 33258工作液,用無菌水洗滌玻片3次,直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴封固液,并以蓋玻片覆蓋。

6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā),觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點或串珠狀熒光小點。

結(jié)果判斷(參考):

陰性:僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。

陽性:除細(xì)胞外,細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。

注意事項:

1.Hoechst工作液對人體有害,請注意防護。

2.固定液有刺激性氣味,建議在通風(fēng)櫥進行固定。

3.支原體檢測時,最好用不含抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)2~3代,這樣容易避免假陰性結(jié)果。

4.本試劑盒用于6孔板檢測時,可以進行50次檢測反應(yīng)。

5.檢測支原體污染,可以使用支原體高效Vero細(xì)胞,這樣可以提高檢測靈敏度,即將被檢測樣品接種于Vero細(xì)胞進行檢測。

NobleRyder 支原體檢測試劑盒 即用型

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