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產(chǎn)品展示
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2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)熒光定量

  • 型   號(hào):71311
  • 價(jià)   格:
  • 更新時(shí)間:2025-04-23
  • 廠家性質(zhì):經(jīng)銷商

2x SYBR qPCR Mix是SYBR I 嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預(yù)混液,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分,可減少操作步驟,縮短加樣時(shí)間,降低污染幾率。其核心組分是全新的抗體法HotmasterTaq DNA聚合酶,配合精心優(yōu)化的Buffer體系,有效抑制非特異性擴(kuò)增
2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)熒光定量

2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)


2x SYBR qPCR Mix(With 50x ROX)熒光定量 

目錄號(hào):71311

產(chǎn)品內(nèi)容

Components

71311-500

500 rxns (20 μl/rxn)

71311-2500

2500 rxns (20 μl/rxn)

2x SYBR qPCR Mix

1 ml x5

1 ml x25

50x ROX Dye 1(高濃度)

200 μl

200 μl x5

50x ROX Dye 2(低濃度)

200 μl

200 μl x5

保存條件

-20℃保存,有效期 24 個(gè)月, 使用前充分融解,輕柔顛倒混勻。短期使用可放在 4 ℃,避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

2x SYBR qPCR Mix是SYBR I嵌合染料法專用的qPCR試劑,為2x 預(yù)混液,包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分,可減少操作步驟,縮短加樣時(shí)間,降低污染幾率。其核心組分是全新的抗體法HotmasterTaq DNA聚合酶,配合精心優(yōu)化的Buffer體系,有效抑制非特異性擴(kuò)增,可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量,獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果,具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。

本產(chǎn)品含有獨(dú)立包裝參比染料50x ROX,用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差, 不同儀器所需ROX Reference Dye濃度不同

操作步驟:(以ABI Step One Plus機(jī)型為測(cè)試機(jī)型)

1. 將DNA模板、引物、2 x SYBR qPCR Mix、ddH2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系:(以20μl反應(yīng)體系為例)

Components

Volume (20μl)

Final Concentration

2x SYBR qPCR Mix

10 μl

Forward Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

Reverse Primer (10μM)

0.4 μl

0.2 μM each

50x ROX Reference Dye 1

0.4 μl

1 x

DNA Template

Variable

As required

ddH2O

Up to 20 μl

Not applicable

注意:

1) 推薦模板加樣量為1-2 μl / 20μl反應(yīng)體系,cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%,基因組DNA的量為10 - 100 ng。

因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同,可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋,以確定最佳的模板使用量。

2) 通常推薦引物濃度為0.2 μM,就可以得到較好的結(jié)果,反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),可降低引物濃度,由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

3) 舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序,實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化。


3. qPCR反應(yīng)程序

注意:

1) 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng),絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。建議采用兩步法qPCR反應(yīng)程序。一般來說,二步法擴(kuò)增特異性高,三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差,可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度;如果因使用Tm值較低的引物等原因,得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí),可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。

2) 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸(退火)溫度的設(shè)定;

3) 延伸(退火&延伸)時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整。

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